DNA瓊脂糖凝膠電泳——萬融實驗

（一）操作規程

1.制膠

（1）根據所需濃度稱取一定量的瓊脂糖加入乾淨的三角瓶中，加入100mL 0.5×TBE電泳緩衝液，放入微波爐中溶解。注意不要沸騰。

（2）將制膠模板兩端用膠帶封好，調節水平，插入梳子。待凝膠在室溫冷卻到60℃左右加入EB（終濃度0.5µg/mL）混勻，倒入模板中。注意倒膠要連續，千萬不能有氣泡。

（3）凝膠自然冷卻後，取出梳子，去掉膠帶，放入已加0.5×TBE的電泳槽中。電泳槽中液面高於膠面1mm，梳子距槽底約1mm（圖2-11）。

圖2-11 電泳槽中凝膠、梳子、電泳緩衝液的位置關係

2.加樣 將DNA樣品和1/6體積的上樣緩衝液混合好加入點樣孔中。注意不要碰壞點樣孔。

3.電泳 接通電源，按5V/cm進行穩壓電泳，待指示劑泳動至適當位置時停止電泳。

4.分析 在凝膠分析儀上觀察拍照並進行分析。

（二）注意事項

1.電泳前 EB是強誘變劑，操作時千萬小心。注意檢查電泳的方向（由負極到正極）與電極的方向是否正確。

2.電泳時 觀察指示劑溴酚藍泳動出點樣孔後再離開。

3.電泳後 要用膠鏟小心取出凝膠，全程都要戴手套操作。