相對和絕對定量同位素標記(isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)技術蛋白組定量分析技術相信很多蛋白組學方面研究的同學們都接觸過。iTRAQ技術是美國應用生物系統(AB SCIEX)公司於2004年推出的一種全新的體外同重同位素標記的相對與絕對蛋白組定量技術。
iTRAQ蛋白組定量技術可實現對多種不同樣品中蛋白的比較,具有重現性好、靈敏度高、定性與定量可同時進行的優勢,已越來越多的被運用到蛋白組學研究中。iTRAQ技術可檢測到的蛋白除了胞漿蛋白外,還有線粒體蛋白、膜蛋白和核蛋白。也能對任何類型的蛋白質進行鑑定,包括高分子量,酸性,鹼性蛋白質。
iTRAQ蛋白組定量分析標籤包括三部分:
1. 報告基團(reporter group):指示蛋白樣品丰度水平。
2. 平衡基團(balance group):平衡報告基團的質量差,使等重標籤重量一致,保證標記的同一肽段m/z相同。
3. 肽反應基團(amine-specific reactive group):能與肽段N端及賴氨酸側鏈氨基發生共價連接,從而標記上肽段。
itraq標籤
iTRAQ蛋白組定量分析的技術優勢
l 高通量:一次最多可以實現8個樣品的定性定量分析,特別適用於採用多種處理方式或來自多個處理時間的樣本的差異蛋白分析。
l 結果可靠:基於高度敏感性和精確性的串聯質譜方法,定性與定量同步進行,同時得出鑑定和定量結果,重複樣品間的蛋白表達量相關性高。
l 靈敏度高:分級分離,降低樣品複雜度,相比凝膠電泳觀測到的蛋白變化在2倍以上,iTRAQ計算出的蛋白變化在1.3-1.6倍之間,可檢測低丰度蛋白。
l 高效:定性定量同步進行,且有較高重複性。
l 自動化程度高:液質連用,自動化操作,分析速度快,分離效果好。
iTRAQ蛋白組定量分析常見應用領域
iTRAQ蛋白組定量分析技術已被廣泛地應用於植物、微生物、動物、環境等多種樣本的蛋白質鑑定和定量。在醫學研究領域也有成功應有,如分析鑑定出腫瘤組織的差異性蛋白,從而尋找樣品對組織癌變的標誌物進行篩選;也可用於篩選與藥物作用的差異性蛋白,進而研究藥物作用的靶點和機制。iTRAQ技術還可以為我們研究疾病的發生、進展機制,發現新的生物學標記物提供有力的技術平台,與蛋白組學完美結合,在醫學,農業,工業得到更大發展。