【實驗目的】
掌握G顯帶染色體標本的製作過程；通過G顯帶核型分析，了解小鼠各條染色體G帶的帶型特徵。
【實驗原理】
染色體顯帶技術是在非顯帶技術的基礎上發展起來的，它能顯示染色體本身更細微的結構，有助於準確識別每一條染色體及診斷染色體異常疾病。
染色體顯帶技術是染色體標本經過一定處理，並用特定染料染色，使染色體顯現明暗或深淺相間的橫行帶紋。通過顯帶技術，使各條染色體都顯現出獨特的帶紋，這就構成了染色體的帶型。每對同源染色體的帶型基本相同而且穩定，不同對染色體的帶型不同。
根據顯帶方法不同可分為Q顯帶、G顯帶、C顯帶、T顯帶等，其中G顯帶技術最為常用。將染色體標本用鹼、胰蛋白酶或其他鹽溶液處理，使染色體上的蛋白質變性，再用Giemsa染液染色，普通顯微鏡下可觀察到深淺相間的帶紋，易著色的陽性帶（Positive Band）為富含A-T的染色體節段，相反，G-C含量多的節段則不易著色，為陰性帶（Negative Band）。G顯帶方法簡便，帶紋清晰，染色體標本可以長期保存，因此被廣泛用於染色體病的診斷和研究。
本實驗採用小鼠骨髓細胞染色體標本，進行G顯帶及G顯帶核型分析。小鼠是遺傳學研究常用的實驗動物，其染色體數目是40條，正常小鼠的核型對腫瘤研究、雜交細胞染色體的分析，以及基因定位等工作都是必要的。
【實驗對象】
昆明種小鼠。
【實驗材料】
器材：光學顯微鏡，37℃水浴箱，普通冰箱，立式染缸，切片架，切片盒，燒杯，量筒，直頭小吸管，pH試紙，吸水紙，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，鑷子。
試劑：秋水仙素，生理鹽水，Giemsa染液，0.25%胰蛋白酶溶液。
【實驗步驟】
（一）小鼠染色體標本製備
1. 注藥 取18～22g小鼠，處死前2～3小時腹腔注射秋水仙素，每10g體重注射0.04%秋水仙素0.1mL，以積累分裂相細胞。
2. 處死 脫頸椎法處死小鼠，即用左手拇指、食指固定小鼠頭後部，右手捏住鼠尾，用力向後上方牽拉，使小鼠頸椎脫臼死亡。
3. 取骨髓 用剪刀剪開後肢的皮膚和肌肉，取出股骨，用一小塊紗布來回搓乾淨附在骨上的血漬和肌肉殘渣。剪掉少許股骨兩端膨大的關節頭（注意：兩端的骨髓中含有很多的分裂相細胞，不宜剪去太多），吸取3mL低滲液於小平皿中，用剪刀儘量剪碎股骨，漂洗，然後將上清液吸入15mL離心管中。
4. 低滲 將裝有低滲細胞懸液的離心管置37℃水浴20分鐘。低滲處理可借滲透作用使細胞膨脹，染色體鋪展，還可使黏附於染色體的核仁物質散開，使染色體分散良好。
5. 預固定 取出離心管，在細胞懸液中加入2～3滴新配製的固定液（甲醇∶冰醋酸=3∶1），立即用吸管吹打均勻，經1500r/min離心8分鐘，吸去上清，留沉澱物。
6. 固定 加入固定液5mL於離心管，用吸管打散細胞團成均勻懸浮液，室溫固定15分鐘，然後以1500r/min離心8分鐘，吸去上清。重複固定一次，步驟同上，離心後吸去上清，再加入1～2滴固定液。
7. 滴片 將細胞團吹打均勻，取出事先在冰水中預冷的載玻片，立即吸取細胞懸液，距載玻片大約30cm的高度滴片，滴加的懸液不能重疊，立即對準玻片吹氣使細胞迅速分散。每個樣品制2～3張玻片，空氣中自然乾燥，待晾乾後染色。
（二） G顯帶
1消化 將配製好的0.25%胰酶溶液裝入立式染色缸中並調pH值至7.0，將其放入37℃恆溫水浴箱中預溫。取染色體製片置胰酶缸中處理5～30秒，期間要不斷地輕輕搖動，使胰酶處理均勻。
2. 漂洗 立即取出玻片放入生理鹽水中沖洗兩次，用濾紙吸去多餘水分。
3. 染色 將標本浸入37℃預溫的Giemsa染液〔1∶10的Giemsa原 液 和PBS（pH6.8）〕中染色15～20分鐘。
4. 漂洗 將標本用自來水沖洗（沖洗要小 心）、晾乾或用濾紙吸干。
5. 分析 顯微鏡下觀察染色體顯帶效果。先在低倍鏡下選擇分散良好的分裂相，然後轉換油鏡觀察其顯帶的情況（若染色體未出現帶紋，則為顯帶不足，若染色體邊緣發毛為顯帶過頭，此時應根據具體情況增減胰蛋白酶處理時間重新處理一張標本）。依次找出各號染色體和性染色體，繪成草圖。各染色體的位置、形狀大小儘量真實（不必繪出帶型），並在各染色體旁邊標明染色體序號。
6. 照相 挑選出數目完全且帶紋清晰的分裂相，進行顯微照相、沖洗、放大，製成小鼠骨髓細胞染色體標本G顯帶中期分裂相照片。
【結果與分析】
1. 獲得帶紋清晰的小鼠骨髓細胞染色體G顯帶標本。
2. 在顯微鏡下觀察染色體G顯帶核型，進行染色體分析。