細菌對藥物的敏感試驗，是指測定抗菌藥物在體外對病原微生物的生長有無抑制或殺滅作用的方法，簡稱藥敏試驗。常用的藥敏試驗方法有紙片法和試管法等。紙片擴散法簡便易行，是生產中選擇用藥常用的藥敏試驗方法；試管法對於檢驗藥物的抗菌效果更為準確可靠，可用於藥物採購前的藥效檢驗。經試管法檢驗對多種病原菌或主要的病原菌有效的藥物，可做成藥敏紙片備用。紙片法的操作程序如下:
01
試驗材料
普通恆溫培養箱、無菌室或超凈工作檯；普通營養瓊脂培養基或MH瓊脂培養基或血液瓊脂培養基；杭州新華 101號定性濾紙、打孔器、西林瓶；手術剪刀、酒精燈、接種環、鑷子、滅菌平皿、手術盤、滅菌的棉簽、酒精棉球、自封袋、記號筆等；待檢組織病料。
02
試驗前準備
1、藥敏紙片的製備
製備紙片
取杭州新華 101號定性濾紙，用打孔器打成直徑6mm的圓形小紙片。以每瓶100片的數量，放入乾淨的西林瓶中，用多層報紙包紮瓶口。160℃乾熱滅菌 2h或121℃高壓滅菌15min，置60℃乾燥箱內烘乾備用。
藥物濃度
抗生素藥物根據《抗微生物藥物敏感性試驗執行標準2010》進行配製，商品藥物應根據其使用說明書進行配製，按照實際使用量的4倍進行配製。
操作方法
以每張濾紙片飽和吸水量為0.01ml進行計算，每100張濾紙片加入藥液1ml，使濾紙將藥液均勻吸凈，置4-8℃冰箱浸泡1小時左右，再將西林瓶置37-50℃的溫箱內2-3天烘乾；或浸泡藥液後取出紙片散開攤於已乾熱滅菌的空平皿中，無菌室過夜，待紙片乾燥後，裝入西林瓶內，密封。
對乾燥過程中容易失效的藥物應採取現場製作，即將配製好的藥液用微量加樣器取100μl加入10片備用紙片浸泡，浸泡後馬上用於抑菌試驗。
藥敏紙片的保存
日常使用的小量紙片應置於含乾燥劑的密封容器內4℃保存，可保存約1個月。長期儲存時應密封存放於-20℃環境中，使用時從低溫環境中取出後，放置平衡到室溫後才可打開，用完後應立即將紙片放回冰箱內的密封容器內。-20℃保存的藥敏片可用6個月。
2、培養基的製備
藥敏實驗的培養基可選用普通營養瓊脂培養基（一般菌選用）、MH瓊脂培養基（大多數菌生長良好）或血液瓊脂培養基（檢測營養要求較高的菌選用）。製備時嚴格按照培養基說明書使用蒸餾水進行配置。注意在配置時一定要混合均勻後放入微波爐或使用萬用電爐加熱至沸騰。使用封口膜或棉塞進行封口（防菌），外層用報紙進行包裝（防水），放入高壓鍋中進行滅菌。將滅菌後的培養基和培養皿放入超凈台中，待培養基不燙手時（60℃左右）將其倒入培養皿（提前標記好製作日期和培養基名稱）中，厚度為3-4mm。晾乾、待其凝固後放入37℃恆溫箱中倒置烘20小時。取出培養皿,放入自封袋封好放冰箱4℃保存，待檢測時用（註：不要放太長時間，以免水分流失太多）。
3、營養肉湯製備
成分
牛肉膏3-5克；蛋白腖10克；氯化鈉5克；蒸餾水1000毫升；
製法
取上述成分加熱至溶解，並矯正PH為7.6之後繼續加熱10分鐘。待溶解液中無明顯殘渣則可用濾紙（濾紙摺疊成扇形或漏斗形）進行過濾，若還有原料殘渣浮於液體當中，則需繼續加熱，直至無明顯原料殘渣時再進行過濾。用濾紙過濾後分裝到試管中，用報紙或牛皮紙包紮後放入高壓蒸汽滅菌器，121℃滅菌20分鐘後備用。如果為成品的營養肉湯，直接按照說明書要求進行配置，待其完全溶解後分裝到玻璃試管（直徑18mm）中，每管以3ml為宜。塞上試管塞，用報紙進行包裝，豎立放到高壓鍋中進行滅菌。
4、病料的採集與處理
打開病雞或新鮮死雞的腹腔，以無菌操作的方法，採取有明顯病變部位的組織，直接放到滅菌的培養皿中（或一次性自封袋中），如病死雞的肝、脾、心、氣囊膜、眼球液、腹水、關節滲出液及膿液、輸卵管內容物等病料，立即進行檢測，如不能及時進行檢測需將病料放到0-4℃保存待檢，不得超過24小時。若24小時內未能進行檢測，需將病料置-20℃保存。
來源：獸藥資訊